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家禽养殖:外行人告诉你鸡弯曲杆菌病对人类危害远比想象的严重

时间 : 2019-11-5 11:11

作者 : 杠后开七小对

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摘要 : 弯曲杆菌病是一种人、禽、畜、兽及野禽的共患病,其病原体是弯曲杆菌属中的3种嗜热菌(空肠弯曲杆菌、结肠弯曲杆菌、海鸥弯曲杆菌),以空肠弯曲杆菌最为常见。空肠弯曲杆菌广泛存在于鸟、禽、狗、猫等动物体内,可 ...

弯曲杆菌病是一种人、禽、畜、兽及野禽的共患病,其病原体是弯曲杆菌属中的3种嗜热菌(空肠弯曲杆菌、结肠弯曲杆菌、海鸥弯曲杆菌),以空肠弯曲杆菌最为常见。

空肠弯曲杆菌广泛存在于鸟、禽、狗、猫等动物体内,可通过污染肉、奶及未经消毒处理的水而导致感染,其涉及到的食品有生的和未煮熟的鸡、生的和巴氏杀菌不彻底的牛奶、蛋制品、生火腿等。商店中购买的新鲜鸡肉59%可能携带空肠弯曲菌。该病菌是最常见的食物中毒原因。

空肠弯曲杆菌可以引起人和动物发生多种疾病,并且是一种食物源性病原菌,是引起人类细菌性腹泻的主要原因,感染后可出现发热、腹泻、呕吐和肌肉痛,造成空场、回肠和大肠组织损伤。致病因素包括粘附、侵袭、产生毒素和分子模拟机制等,通过分子模拟机制可以引起最严重的并发症格林巴利综合征(吉兰巴雷综合征)。空肠弯曲菌可以通过产生细胞紧张性肠毒素、细胞毒素和细胞致死性膨胀毒素而致病。

在此,科普一下鸡弯曲杆菌病(CH)的相关知识,希望家禽养殖的朋友们为千家万户的餐桌提供安全的食材。

家禽养殖:外行人告诉你鸡弯曲杆菌病对人类危害远比想象的严重

【概述】

鸡弯曲杆菌病(鸡弧菌性肝炎CH)是由空肠弯曲杆菌感染引起的一种幼鸡或成年鸡的慢性细菌性传染病。以肝脏肿大、充血、出血、坏死性肝炎伴发脂肪浸润为特征。发病率高、死亡率低及慢性经过。自然条件下,可发生在各年龄的鸡,以产蛋鸡群和后备鸡群较多发。腹腔内常积聚大量血水,又称出血病。治宜消除病原。

空肠弯曲菌是一种人畜禽共患病病原菌,可以引起人和动物发生多种疾病,并且是一种食物源性病原菌,是引起人类细菌性腹泻的主要原因,致病因素包括粘附、侵袭、产生毒素和分子模拟机制等,通过分子模拟机制可以引起最严重的并发症格林巴利综合征(吉兰巴雷综合征)。空肠弯曲菌可以通过产生细胞紧张性肠毒素、细胞毒素和细胞致死性膨胀毒素而致病。

【病原学】

该病的病原体是弯曲菌科弯曲菌属的空肠弯曲杆菌。

形态与染色:该菌体轻度弯曲,呈现有弧形螺旋形、S形及逗号形状,较长的可有4-5个弯曲。大小为1.5-5μm×0.2-0.8μm。一端或两端有鞭毛,运动快速,在暗视野镜下观察似飞蝇。有荚膜,不形成芽胞。革兰氏染色阴性。微嗜氧的弯杆菌。

培养特性:微需氧菌。在血琼脂上易生长,菌落有光滑型和粗糙型两种。在含血清的肉汤培养中生长,也可在10%二氧化碳环境中的牛肉浸膏琼脂培养基上生长,形成细小、圆形、湿润、边缘整齐、无色透明的菌落。在血液培养基上不溶血。在普通培养基上难以生长。在凝固血清和血琼脂培养基上培养36小时,可见无色半透明毛玻璃样小菌落,单个菌落呈中心凸起,周边不规则,无溶血现象。在含2.5-5%氧和10%二氧化碳的环境中生长最好。最适温度为37-42℃。在正常大气或无氧环境中均不能生长。

生化特性:生化反应不活泼,不发酵糖类,不发酵甘露醇,不分解尿素,能产生微量或不产生硫化氢。靛基质阴性,可还原硝酸盐。氧化酶和过氧化氢酶为阳性。甲基红和vp试验为阴性。枸椽酸盐培养基中不生长。在弯曲杆菌属中唯有空肠弯曲杆菌马尿酸呈阳性反应。

约有40%的菌株可以水解酪蛋白、核糖核酸和脱氧核糖核酸,90-95%的菌株具有碱性磷酸酶活性,6%的菌株芳香基硫酸酯酶阳性。在0.1%亚硒酸钠斜面上生长,还原亚希酸盐。水解吲哚酚。在含有0.1%胆汁或1.5%氯化钠的培养基中可生长。

抵抗力不强:对干燥极其敏感,易被干燥、直射日光所迅速杀死。56℃5分钟可被杀死。在20℃存活不超过2小时。在4℃的水中,其感染力可保持4周。在-9℃和-12℃保存的分割鸡中,可存活10天,而在-20℃贮藏时,182天后仍可从中检出该菌。

对各种消毒剂较敏感,弱消毒剂可迅速杀灭,5%过氯酸钠的1:200000稀释液、0.25%福尔马林溶液可在15分钟内杀死;0.15%有机酚、1:50000季胺盐、0.125%戊二醛均可在1分钟内杀死。

对红霉素、新霉素、庆大霉素、四环素、氯霉素、卡那霉素等抗生素敏感。近年发现了不少耐药菌株及多重耐药性菌株。

抗原构造:DNA中的G+C克分子含量为30%-35%。与肠道杆菌一样,具有O(菌体)、H(鞭毛)和K(荚膜)3种抗原。根据O抗原,可把空肠弯曲菌分成45个以上血清型,第11、12和18血清型最为常见。

【流行病学】

在自然条件下只感染鸡和火鸡,多见于开产前后的鸡或已开产数月的母鸡,一般为散发。偶尔也发生于雏鸡。

饲养管理不善、应激反应,鸡患球虫病、大肠杆菌病、霉形体病、鸡痘等是本病发生的诱因。

传播途径主要是消化道。病原菌通过染菌粪便,污染的饲料、饮水和用具等水平传播途径而经消化道感染。被健康鸡采食后而感染。多呈散发性或地方性流行。本病发病率高,死亡率低,-般为2-5%。

传染来源禽是嗜热弯曲杆菌最重要的贮存宿主。90%的肉鸡可被感染,88%的家鸭可带菌。

易感动物自然感染发病的仅见于鸡群,以即将开产的小母鸡和产蛋数月的母鸡最易感。雏鸡可感染并带菌,成年鸡也可发病。

单纯的鸡弧菌性肝炎呈慢性经过,通常在几个月内出现死亡鸡,发病率高、死亡率低,常被忽略。

【临床症状】

鸡弧菌性肝炎无特征性症状。潜伏期约为2天,以缓慢发作和持续期长为特征。通常鸡群中只有一小部分鸡在同一时间内表现症状,可持续数周,死亡率2-15%。

病鸡精神沉郁,畏寒怕冷,闭目缩颈,呆立不动,羽毛松乱,两翅下垂,食欲不振,发育不良,进行性消瘦,体重减轻,鸡冠发育不完善,萎缩苍白、干燥有皮屑,腹部膨大,排水样稀粪,后肛门周围被粪便污染,排粪困难,发病率达85%以上。

急性型发病初期,有的不见明显症状,雏鸡群精神倦怠、沉郁,严重者呆立缩颈、闭眼,对周围环境敏感性降低。羽毛杂乱无光,肛门周围污染粪便,多数鸡先呈黄褐色腹泻,然后呈浆糊样,继而呈水样,部分鸡此时即急性死亡。亚急性型呈现脱水、消瘦、陷入恶病质,最后心力衰竭而死。慢性型精神萎顿、鸡冠发白、干燥、萎缩,可见鳞片状皮屑,逐渐消瘦,饲料消耗降低。

雏鸡常呈急性经过,青年蛋鸡群常呈亚急性或慢性经过,开产期延迟,产蛋初期沙壳蛋,软壳蛋较多,不易达到预期的产蛋高峰。产蛋鸡呈慢性经过,消化不良,后期因轻度中毒性肝营养不良而导致自体中毒,表现为产蛋率显著下降,产蛋率下降25-35%,甚至因营养不良性消瘦而死亡。仔鸡发育受阻,腹围增大,并出现贫血和黄疽。也有很肥壮的鸡急性死亡,死前48-72小时内还在产蛋。

【病理变化】

病鸡消瘦和发育不良,病死鸡血液凝固不全。腹腔内积有大量未凝固的血液。最明显病变在肝脏。急性表现为肝实质变性,肝脏肿大、质脆、出血,肝被膜下有出血区、血肿、坏死灶。肝脏表面因有许多出血点而呈斑驳状。在肝脏表面和实质内散布有多量星状坏死灶,或布满菜花样坏死区,肝脏呈黄褐色,胆囊内充满黏性分泌物。常由于肝破裂而致急性内出血死亡。胆囊肿大,脾脏肿大、出血,肾脏肿大,心肌苍白,盲肠膨大,肠腔内积满黏液和水样内容物。慢性表现为肝硬化、萎缩,并伴有腹水;脾肿大,偶见黄色易碎的梗死区;卵巢可见卵泡萎缩退化,仅剩下豌豆大小。

【诊断鉴别】

初步诊断

根据流行病学、临床症状和病理变化可以作出初步诊断,确诊必须进行实验室检测验证。

鉴别诊断

鸡弯曲杆菌性肝炎应注意与鸡白痢、鸡伤寒及鸡白血病的鉴别。病鸡剖解病变肝脏,由于鸡白痢、鸡伤寒及鸡白血病都可引起肝肿大,并出现类似病灶,易与本病相混淆。鸡白痢、鸡伤寒的病原为革兰氏阴性短杆菌,可用相应的阳性抗原与患鸡血清做平板凝集实验而区别。鸡白血病为病毒病,其显著特征是除肝脏外,脾和法氏囊也有肿瘤结节增生,实验室诊断无菌取胆汁涂片镜检而区别。

实验室诊断

取肝脏进行组织病理学诊断:肝细胞普遍发生变性、散在大小不一的坏死灶,可见有大量淋巴细胞和异嗜性白细胞浸润。

病原学检查:无菌取肝胆汁、肝脏或心包液制成1:10悬液,加入杆菌肽锌(25mg/mL),注入6-8日龄鸡胚卵黄囊内,继续孵化,3-5天鸡胚死亡后,用卵黄液涂片、革兰氏染色镜检。

培养检查:在43℃微厌氧条件下,无菌采集病死鸡胆汁,接种于巧克力培养基上生长出菌落,菌落形态扁平、透明、灰色,有融合倾向,染色镜检,可见革兰氏阴性弯曲杆菌,形态多样。

分离培养:短时间用棉拭子沾取服用抗生素前的样品,将样品放入内加入万古霉素10mg、多粘菌素B2500iu、amphoterin 13mg、cephalocin 15mg的肉汤中进行增菌培养,后接种于哥伦比亚血(5%脱纤维绵羊血)平板上,培养24小时观察,如果有杂菌,则选取单个菌株纯化,后使用马尿酸和氧化酶检测,有条件可以做血清凝集试验。初筛将阳性以及疑似菌株进行PCR检测(16S,mapA,hipO),最终确定空肠弯曲菌。

空肠弯曲菌的检测鉴定方法很多,免疫传感器方法、基于质谱方法、实时荧光 PCR 方法、LAMP快速检测方法、mCCDA方法、Skirrow方法等。

根据选择性培养基生长特征、镜检和诸多生化指标来判别。按照ISO10272-2017 方法和国标GB 4789.9-2014方法。空肠弯曲菌是能水解马尿酸盐的弯曲菌,并且是区分空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的生化指标。一般步骤分样品处理、增菌与预增菌、分离、鉴定四个步骤,菌种分离是实验成功的关键问题。

分离空肠弯曲菌使用弯曲菌显色培养基进行分离。常见的空肠弯曲菌分离平板为mCCDA、Skirrow等平板上进行,弯曲杆菌丰饶生长,呈现浅紫至紫色的菌落,可就样品对弯曲杆菌进行选择性分离和鉴定。

1、检验程序

空肠弯曲菌检验程序:

家禽养殖:外行人告诉你鸡弯曲杆菌病对人类危害远比想象的严重

2、操作步骤

A、样品处理

整禽等样品:用200mL0.1%的蛋白胨水中充分冲洗样品的内外部,并振荡2min-3min,经无菌纱布过滤至250mL离心管中,16000g离心15min后弃去上清,用10mL0.1%蛋白胨水悬浮沉淀,吸取3mL于100mL Bolton肉汤中进行培养。

需表面涂拭检测的样品:无菌棉签擦拭检测样品的表面(面积至少100c㎡以上),将棉签头剪落到100mL Bolton肉汤中进行培养。

水样:将4L的水(对于氯处理的水在过滤前每升水中加入5mL 1mol/L硫代硫酸钠溶液)经0.45μm滤膜过滤,把滤膜浸没在100mL Bolton肉汤中进行培养。

B、预增菌与增菌

在微需氧条件下,36℃±1℃培养4h,如条件允许配以100r/min的速度进行振荡。必要时测定增菌液的pH值并调整至7.4±2,42℃±1℃继续培养24h-48h。

C、分离

将24h增菌液、48h增菌液及对应的1:50稀释液分别划线接种于Skirrow血琼脂与mCCDA琼脂平板上,微需氧条件下42℃±1℃培养24h-48h。另外可选择使用空肠弯曲菌显色平板作为补充。

观察24h培养与48h培养的琼脂平板上的菌落形态,mCCDA琼脂平板上的可疑菌落通常为淡灰色有金属光泽、潮湿、扁平呈扩散生长的倾向。Skirrow血琼脂平板上的第一型可疑菌落为灰色、扁平、湿润有光泽呈沿接种线向外扩散的倾向;第二型可疑菌落常呈分散凸起的单个菌落边缘整齐、发亮。空肠弯曲菌显色培养基上的可疑菌落按照说明进行判定。

D、鉴定

弯曲菌属的鉴定

挑取5个(如少于5个则全部挑取)或更多的可疑菌落接种到哥伦比亚血琼脂平板上,微需氧条件下41℃±1℃培养24h-48h,进行鉴定,结果符合的可疑菌落确定为弯曲菌属。弯曲菌属的特性如下:

形态观察:挑取可疑菌落进行革兰氏染色镜检。革兰氏阴性,菌体弯曲如小逗点状,两菌体的末端相接时呈S形、螺旋状或海鸥展翅状。

动力观察:挑取可疑菌落用1mL布氏肉汤悬浮,用相差显微镜观察运动状态。呈现螺旋状运动。

氧化酶试验:用铂/铱接种环或玻璃棒挑取可疑菌落至氧化酶试剂润湿的滤纸上,如果在10s内出现紫红色、紫罗兰或深蓝色为阳性。

微需氧条件下25℃±1℃生长试验:挑取可疑菌落,接种到哥伦比亚血琼脂平板上,微需氧条件下25℃±1℃培养44h±4h,观察细菌生长情况。生长。

有氧条件下42℃±1℃生长试验:挑取可疑菌落,接种到哥伦比亚血琼脂平板上,有氧条件下42℃±1℃培养44h±4h,观察细菌生长情况。不生长。

空肠弯曲菌的鉴定

过氧化氢酶试验:挑取菌落,加到干净玻片上的3%过氧化氢溶液中,如果在30s内出现气泡,则判定结果为阳性。

马尿酸钠水解试验:挑取菌落,加到盛有0.4mL 1%马尿酸钠的试管中制成菌悬液。混合均匀后在36℃±1℃水浴中温育2h或36℃±1℃培养箱中温育4h。沿着试管壁缓缓加入0.2mL茚三酮溶液,不要振荡,在36℃±1℃的水浴或培养箱中再温育10min后判读结果。若出现深紫色则为阳性;若出现淡紫色或没有颜色变化则为阴性。

吲哚乙酸酯水解试验:挑取菌落至吲哚乙酸酯纸片上,再滴加一滴灭菌水。如果吲哚乙酸酯水解,则在5min-10min内出现深蓝色,若无颜色变化则表示没有发生水解。

空肠弯曲菌的鉴定结果:

空肠弯曲菌:过氧化氢酶试验阳性、马尿酸盐水解试验阳性、吲哚乙酸脂水解试验阳性

结肠弯曲菌:过氧化氢酶试验阳性、马尿酸盐水解试验阴性、吲哚乙酸脂水解试验阳性

海鸥弯曲菌:过氧化氢酶试验阳性、马尿酸盐水解试验阴性、吲哚乙酸脂水解试验阴性

乌普萨拉弯曲菌:过氧化氢酶试验阴性、马尿酸盐水解试验阴性、吲哚乙酸脂水解试验阳性

替代试验:对于确定为弯曲菌属的菌落,可使用生化鉴定试剂盒或生化鉴定卡代替进行鉴定。

E、结果报告

综合以上试验结果,报告检样中检出或未检出空肠弯曲杆菌。

【预防措施】

该病基本上属于散发,零星死亡,预防主要是平时加强饲养管理,严格卫生消毒,减少各种应激因素,做好球虫病防治工作等综合措施,做到全进全出,对鸡舍进行彻底消毒后方可进雏鸡。在饲喂方面,饲料营养要丰富。在防疫方面,要防止有些免疫抑制病如马立克氏病、传染性法氏囊病等。提高鸡群抵抗力和抗应激能力来达到防治该病的目的。

加强鸡舍内带鸡消毒,该菌对各种消毒剂较敏感,5%过氯酸钠的1:200000稀释液、0.25%福尔马林溶液都可在15分钟内杀死本菌;0.15%有机酚、1:50000季胺化合物、0.125%戊二醛均可在1分钟内杀死本菌。

【防治方法】

饲料和饮水中添加药物进行防治。对发病鸡群,在没有分离细菌及药敏试验条件的情况下,可选用药物进行防治,如金霉素、强力霉素、红霉素、庆大霉素、卡那霉素、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉、环丙沙星、恩诺沙星等。一般5天为一疗程,由于本病常复发,治疗时,无论用哪种药物都必须坚持两个疗程以上。

药物消毒:隔离病鸡。加强消毒病鸡,严格隔离饲养,鸡舍由1周消毒1次,改为1天带鸡消毒1次。用3%的次氯酸和2%的癸甲溴氨药物交替消毒。水线要每天用消毒药清洗1次,环境用3%的氢氧化钠溶液1-2天消毒1次。

药物治疗:病原菌对庆大霉素、红霉素、氯霉素、链霉素、卡那霉素、新霉素、四环素族、林可霉素均敏感。对青霉素和头孢菌素有耐药。治疗时可选用强力霉素,庆大霉素、环内沙星或蒽诺沙星等药物,为防止复发,用药疗程可延至8-10天。

1、痢特灵+环丙沙星+庆大霉素

鸡全群用药:0.04%痢特灵拌料;配合环丙沙星1g/20kg水,自由饮水。连用3-5d。

挑病鸡肌注:庆大霉素,用量 20mg/kg体重,肌肉注射,每日1次。病情严重鸡加倍。

2、甲砜霉素+土霉素+利巴韦林

土霉素粉50-100g/50kg饲料,拌料全日喂服,配合甲砜霉素5-7g/50kg水+利巴韦林2.5g/50kg水,全日自由饮服,两药联用4-5天。

3、链霉素+四环素或土霉素

链霉素5万IU /只鸡,肌肉注射,每日2次。配合四环素或土霉素拌料,用量 2g/kg饲料,连喂3-5天。

4、土霉素+痢特灵

土霉素20-80g/100kg饲料,拌料混饲,连喂4-5d。再用痢特灵10-40g/100kg饲料,混饲,连用5d。

5、庆大霉素注射液,肌肉注射,3000-4000IU /次,每日2次,连用3-5d。

6、氟哌酸+甲硝唑+土霉素+磺胺二甲嘧啶

氟哌酸0.2g/kg饲料+甲硝唑3-5mg/kg饲料,拌料混饲。连用2-3d。再用土霉素1-3g/kg饲料+磺胺二甲嘧啶1-2g/kg饲料,拌料混饲。连用2-3d。

7、土霉素+甲硝唑

土霉素200-800mg /kg饲料+甲硝唑1g/kg饲料,拌料混饲,连用5-7天。

8、丁胺卡那霉素0.5ml/kg体重,肌肉注射,每天1次,连用2天。

9、2.5%恩诺沙星注射液,肌肉注射,剂量5ml/kg体重,每日1次,连用3天。

10、5%恩诺沙星或5%环丙沙星,用量1ml/kg水,自由饮水,连饮3-5天。

11、红霉素,按0. 01%-0.03%拌料饲喂,或按 0.005%-0.02%饮水,连用5-7天。


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